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        血清中16種全氟及多氟烷基化合物的測定-超高效方案
        
    
        更新時間：2024-07-24       點擊次數：1186
        
    
        
    	
        簡介
        本方法使用創新型分體式HMR凈化管/96孔板結合96孔正壓固相萃取裝置一步式凈化血清樣品，再通過LC-MS/MS進行檢測，回收率達90%左右。樣品處理過程簡單，結果準確。
         
        方法優勢
        Ø                      蛋白沉淀和磷脂去除一步完成，可有效去除血清中蛋白、磷脂類化合物對實驗結果的影響
        Ø                      通過式凈化，極大簡化前處理步驟，約1h即可完成前處理操作
        Ø                      上樣量僅需50μL，大大節省了寶貴的樣品
        Ø                      試劑耗材使用量更少，更加環保節約
        Ø                      柱效遠超直通式SPE，回收率穩定，可達90％左右
         
        配套設備及耗材
                    
                                
        序號
                            		                        
        產品名稱
                            		                        
        產品描述
                            		        
                
                                
        1
                            		                        
        96孔正壓固相萃取裝置
                            		                        
        EZ PRE-96正壓固相萃取裝置
                            		        
                
                                
        2
                            		                        
        96孔氮吹儀
                            		                        
        EZ VAP-96氮吹儀
                            		        
                
                                
        3
                            		                        
        雙位96孔氮吹儀
                            		                        
        EZ VAP-192雙位96孔氮吹儀
                            		        
                
                                
        4
                            		                        
        MixMate® 混勻小精靈
                            		                        
        MixMate®主機，不含樣品管管架，230 V/50-60 Hz（CN）
                            		        
                
                                
        5
                            		                        
        8道移液器
                            		                        
        8-通道，10-100µL, 可調量程
                            		        
                
                                
        6
                            		                        
        超效分體96孔集成板HMR
                            		                        
        HMR S-micro BIO 96 Well, 15mg, 1 mL, 1/PK
                            		        
                
                                
        7
                            		                        
        超效分體96孔SPE板HMR
                            		                        
        HMR S-micro BIO SPE, 15mg, 1 mL, 100/PK
                            		        
                
                                
        8
                            		                        
        超效96孔板微徑小柱適配器
                            		                        
        Micro columnadapter rack，SUS,1/PK
                            		        
                
                                
        9
                            		                        
        20種全氟混標（包含方法中15種全氟）
                            		                        
        PFAS Mixture with 20 analytes, 5 µg/mL in Methanol/Water，1mL
                            		        
                
                                
        10
                            		                        
        11-氯-3-氧雜全氟十一烷磺酸鉀
                            		                        
        50 µg/mL，1mL，甲醇/水，CAS：83329-89-9
                            		        
                
                                
        11
                            		                        
        13種全氟內標
                            		                        
        Mass-Labelled PFC Extraction Standards Solution 2.0μg/mL 1.2mL
                            		        
                
                                
        12
                            		                        
        血清中全氟質控品Y2403
                            		                        
        INSPQ PFC Reference Material Y2403，1/kit
                            		        
                
                                
        13
                            		                        
        血清中全氟質控品Y2301
                            		                        
        INSPQ PFC Reference Material Y2301，1/kit
                            		        
                
                                
        14
                            		                        
        血清中全氟質控品Y2304
                            		                        
        INSPQ PFC Reference Material Y2304，1/kit
                            		        
                
                                
        15
                            		                        
        Leosil C18/PFP核殼柱（GB23200.121方法專用）
                            		                        
        Leosil Shell C18/PFP, 2.7µm, 100* 2.1mm, 1/PK
                            		        
                
                                
        16
                            		                        
        96孔收集板
                            		                        
        Collection Plate, 1 mL/Round/U-Shaped, 96 Well, 10/PK
                            		        
                
                                
        17
                            		                        
        封板膜
                            		                        
        660 Tape Sealing Pad for 96 Well Plate，25 Sheets/Pad，10Pad/pk
                            		        
            
         
        樣品前處理
        血清中16種全氟及多氟烷基化合物的測定-超高效方案 
         
        儀器條件
        1）色譜條件
        色譜柱：Leosil C18/PFP核殼柱 (2.7µm, 100* 2.1mm）
        流動相：5mmol/L乙酸銨甲醇（A），5mmol/L乙酸銨水溶液（B）
        流速：0.4mL/min
        柱溫：50℃
        進樣量：2μL
         
        流動相梯度表
        血清中16種全氟及多氟烷基化合物的測定-超高效方案 
         
        2）質譜條件
        AB 6500+質譜檢測器采用多反應檢測模式（Multiple
        Reaction Monitoring，MRM），ESI負離子模式。
        離子源：電噴霧離子源；
        掃描方式：負離子掃描；
        檢測方式：多反應離子監測（MRM）；
        電噴霧電壓：-4500V；
        離子源溫度：400℃；
        輔助氣1：60psi；
        輔助氣2：60psi；
        氣簾氣：30psi；
        碰撞氣體：Medium
         
        目標PFASs的離子對、錐孔電壓、碰撞能量等參數見下表
        血清中16種全氟及多氟烷基化合物的測定-超高效方案 
        血清中16種全氟及多氟烷基化合物的測定-超高效方案 
         
        方法定量限
        在以下兩種方法中取最大值作為本項目的方法定量限（Limit of quantification，LOQ）：（1）在實際血清基質中滿足信噪比大于10的最低濃度，信噪比采用RMS（Root Mean Square，RMS）方法；（2）標準曲線工作范圍內滿足實測濃度在理論值偏差±20％之內的最低濃度。由于本研究中樣品未經濃縮和稀釋，無稀釋倍數，因此方法定量限即為LOQ，如下表。
         
        16種PFASs的定量限
        血清中16種全氟及多氟烷基化合物的測定-超高效方案 
         
        回收率和精密度
        血清中16種全氟化合物不同水平加標回收率和精密度（n=6）
        血清中16種全氟及多氟烷基化合物的測定-超高效方案 
        血清中16種全氟及多氟烷基化合物的測定-超高效方案 
         
        實驗注意事項
        1、內標體積太小（50、20微升），稍微有損失，就會影響定量，所以建議先加樣品、再加內標，最后加乙腈；
        2、加液體過程中，一定注意盡量讓移液槍的槍頭接近凈化管中最上層篩板加液。需要正確使用移液槍，特別是小體積加樣時；
        3、建議分兩次加入乙腈。如果只加一次乙腈，可能洗脫不完全，凈化管里有殘留。壓完一次，加入乙腈，再正壓；
        4、乙腈：血清的比例從3：1開始優化；
        5、其他項目根據化合物的性質選擇甲醇或乙腈作為提取溶劑。